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电泳实验总结(实用5篇)

时间:2024-02-18 11:04:14 总结报告

电泳实验总结 第1篇

核酸分子是两性解离分子,在高于其等电点的电泳缓冲液中,其碱基不解离,而磷酸基团全部解离,核酸分子因而带负电荷,电泳时向正极迁移。

琼脂糖主要从海洋植物琼脂中提取而来并经糖基化修饰,为一种聚合链线性分子,使用琼脂糖凝胶作为电泳支持介质,发挥分子筛功能,使得大小和构象不同的核酸分子的迁移率出现较大差异,从而达到分离的目的。

因此,目前多用琼脂糖为电泳支持物进行平板电泳,其优点如下。

(1)琼脂糖凝胶电泳操作简单,电泳速度快,样品不需事先处理就可以进行电泳。

(2)琼脂糖凝胶结构均匀,含水量大(约占 98%~99%),近似自由电泳,样品扩散较自由电流,对样品吸附极微, 因此电泳图谱清晰,分辨率高,重复性好。

(3)琼脂糖透明无紫外吸收,电泳过程和结果可直接用紫外光灯检测及定量测定。

(4)电泳后区带易染色,样品极易洗脱,便于定量测定。制成干膜可长期保存。

电泳实验总结 第2篇

1、琼脂糖凝胶溶液配制时总液体量不宜超过锥型瓶50%容量。

2、加热时可以中途摇动摇动,防止琼脂糖凝胶凝在锥形瓶底部。

3、注意不要损伤梳底部的凝胶。防止加样时样品漏出。

4、凝胶浓度越低,分辨的片段越大;凝胶浓度越高,分辨的片段越小。

5、使用紫外透射仪观察,紫外光对DNA 分子有损伤作用,不可长时间照射。从胶上回收DNA时,应尽量缩短光照时间以减少紫外光切割DNA。

6、紫光灯下观察时应戴上防护镜,以免损伤眼睛。

电泳实验总结 第3篇

● 配置量:1mL

● 配制方法:

1. 称取 g 过硫酸铵。

2.  加入 1 ml 的双蒸水后搅拌溶解。

3.  贮存于 4℃。注意:10%过硫酸铵溶液在 4℃保存时可使用 2 周左右,超过期限则会失去催化作用,因此最好在使用前新鲜配制

SDS电泳在制胶时,单体贮液无需抽气,以防止产生泡沫。且聚合后的凝胶在室温下放置,而不是4°C放置过夜,这样可以使凝胶充分聚合,以提高电泳的分辨率,同时也能防止SDS在凝胶中结晶。由于SDS的高pH会使丙烯酰胺水解,所以自制的SDS凝胶最多可在室温下保存4天。若需要长期保存,最好选用的Tris-醋酸缓冲液。

文稿:xxx

校对:煲仔饭

素材:Canva

参考资料:

《蛋白质电泳技术》

电泳实验总结 第4篇

琼脂糖凝胶电泳对核酸的分离作用主要是依据它们的相对分子量质量及分子构型,同时与凝胶的浓度也有密切关系。

1、核酸分子大小与琼脂糖浓度的关系

(1)DNA分子的大小在凝胶中,DNA 片段迁移距离(迁移率)与碱基对的对数成反比,因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较,便可测出未知片段的大小。

(2)琼脂脂糖的浓度 如下表所示,不同大小的DNA需要用不同浓度的琼脂糖凝胶进行电泳分离。

琼脂糖浓度与DNA分离范围:

2、核酸构型与琼脂糖凝胶电泳分离的关系

不同构型 DNA 的移动速度次序为:供价闭环 DNA(covalently closed circular,cccDNA)>直线 DNA>开环 的双链环状 DNA。

当琼脂糖浓度太高时,环状 DNA不能进入胶中,相对迁移率为 0(Rm=0),而同等大小的直线双链 DNA(刚性棒状)则可以长轴方向前进(Rm>0),由此可见,这三种构型的相对迁移率主要取决于凝胶浓度,但同时,也受到电流强度、缓冲液离子强度等的影响。

电泳实验总结 第5篇

垂直平板电泳的凝胶通常被灌注在两块玻璃板之间。垂直放置,周围用硅油(或其他物质)密封,或用夹子夹紧。灌胶前要仔细检查密封性,以免漏胶。

灌胶完成后,将梳子从顶部插入,以形成加样孔。

凝胶聚合后如有条件,保存12小时后再用,以使凝胶充分聚合,孔径均匀,以改善电泳分辨率。如条件不允许,应至少等1小时再进行电泳。

在垂直电泳装置上可进行连续电泳或不连续电泳。连续电泳仅有分离胶,整个电泳使用相同的缓冲系统,所以灌胶十分简便。

不连续电泳则需要先灌注分离胶(均一胶或梯度胶),再灌注浓缩胶。按照配方在模具中灌注分离胶后,小心地在分离胶表面加一层水(或水饱和的异丙醇或正丁醇),封住胶面,以促使凝胶聚合并使凝胶表面平直。凝胶在30°C~40°C放置40分钟~1个小时后,可看到一条界线,这表示凝胶已聚合。

将水(或水饱和的异丙醇或正丁醇)吸掉,然后灌注浓缩胶,再选择与凝胶厚度相当的梳子插入。为防止气泡陷入,梳子应当倾斜插入。而后让模具在30~40°C下放置40min~1h,使凝胶聚合。同样,条件允许的话,凝胶聚合后应保存12小时后再用,以使凝胶充分聚合,孔径均匀,以改善电泳分辨率。需要注意的是,如果带着梳子过夜可能会影响分辨率,所以浓缩胶最好在使用前再灌注。